ELISA试剂盒吸光度测定值

ELISA试剂盒测定疫苗抗体之如何处理实验数据。此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点。由于ELISA试剂盒测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同，故而在ELISA试剂盒测定比色时，最好是使用双波长比色。

ELISA试剂盒做得很好的话批间CV都要有10～15％左右，最好用同一个抗原，但对于包被的抗原浓度对OD的影响不是很大，只要不是差别太大即可。抗血清当然要用同一个稀释度了。另外比较的话就必每批，每块板上的样品都要伴随着一个参比品一同做，参比品最好还是同一个这样才能保证实验结果的可比性。

1） 高结合力

此种酶标板，表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达300~400ng IgG/cm2，主要结合的蛋白分子量＞10kD。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，ELISA试剂盒不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后，以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位，需使用蛋白作为封闭剂。

2) 中结合力

此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合，适合作为分子量＞20kD的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。

3)氨基化

ELISA试剂盒这种酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基，其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值，ELISA试剂盒其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污剂的蛋白分子。