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ELISA实验新手们需注意的细节


酶免官方商城 / 2021-12-24

1.不管是试剂盒,仍是其它产品,在运用之前我们都要仔细阅览阐明书。

2.相同的,必定要确认试剂盒是不是在有效期内。

3.按阐明书确认一切试剂齐全(数量、体积)。

4.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法试验者,留意低温保存。

5.ELISA试验中为了确认信号和低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预试验中进行互相相抗的滴定。一起,应包含在恰当规模内的规范品的系列稀释。按试剂阐明书常规提供的规模进行操作。

6.规范品的制造:关于每种细胞因子应仔细阅览阐明书,留意每批的细节。在运用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其间的细胞因子。根据每批阐明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。  

7.一般待测抗原规范曲线的线性规模的可通过将规范品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用规范的ELISA试剂盒操作流程、扩大试剂盒、第三类试剂、或改动酶底物体系可在必定规模内提高灵敏度。

8.根据检测标本数量确认所需试剂的量。
9.按阐明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂,DIY夹心法ELISA常见技能攻略。
10.挑选抗体时挑选一个单抗和一个多抗进行配对;若挑选两个单抗,有必要辨认不同表位的抗体;从同一家公司挑选抗体对。

11.为了优化灵敏度,建议过夜孵育规范品和标本。
12.若运用过氧化物酶作为显色体系,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
13.当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
14.预备好一切试验额定所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。

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