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免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间(批内)的重复性和多次实验之间(批间)的重复性。CV值高则表明精确度低,那么今天小编就和跟你们聊一聊如何提高ELISA的精确重现性。
贮液瓶
为避免污染,不同的试剂使用不同的贮液瓶。一些试剂或样本很容易被污染(比如唾液、氧化剂等),请参考说明书操作。必要时候采取一些预防措施保护溶液。另外,要保证盛放试剂或洗液的加样槽的清洁度,避免造成污染。
封板覆膜
使用过的封板覆膜可能含有上一步实验残留的试剂,如果重复使用会造成孔板污染,从而导致精确性低。建议每一次孵育使用新的封板覆膜。
移液的一致性是实验重复性好的关键。移液时必须保持平稳、一致的速度。吸液和加液时要避免突然挪动移液器。
移液时的注意事项
1. 检查移液器枪头,确保其正确安装在移液器末端。
2. 加不同的试剂和样品时需更换枪头。
3. 加液的体积不能少于说明书上建议的体积,否则会降低实验的准确性和重复性。
4. 一些溶液可能容易吸附在枪头的内壁或外壁,用样本或试剂来润洗枪头可降低或避免液体的表面张力,从而提高实验的准确性。
5.针对有黏性的溶液,吸液时需要在溶液中平衡几分钟再取出。
6.如果加液时枪头有气泡产生,则将液体重新注入溶液中,重新缓慢地取液。如果依然有气泡产生,弃去枪头,换新的枪头。
7.不同的溶液使用不同的贮液瓶。