怎样更好的利用ELISA试剂盒

在生产过程中，不同批次试剂的质量，实验保证完全一致非常困难，ELISA试剂盒甚至通过批检验项目和结果也不同，因此必须选择和订购试剂长批次，并确保ELISA试剂盒保存条件。严格执行本标准可以避免因试剂批号变化与质量控制系统和复杂的过程，重新评价试剂重新建立，并能保证结果的稳定性；有效期短，使用率低的试剂，应小包装，包装，可每次都是采取，以避免重复冻融破坏试剂引起的。

不易吸附在聚苯乙烯载体非蛋白抗原可采用特殊涂层的方法。例如，在抗抗体的检测，使用作为包被抗原，与固相载体一般不能直接与核酸结合。通过紫外辐照聚苯乙烯板（如30的紫外灯，75照射12小时），以增加其吸附性能。基本的蛋白质固相载体，ELISA试剂盒如多聚赖氨酸，精蛋白作为预涂层，而且可以提高核酸的结合力。ELISA试剂盒也可用亲和素-生物素系统间接涂有链霉亲和素，第一涂层的载体，然后加入生物素标记的，这个包是均匀，牢固，已扩大应用于各种抗原的定量测定。

在 ELISA的使用过程中常见问题有很多如， 加样器不确；尤其10ul以下的加样器，对结果影响极大；  保温设备不良；  洗涤用水不规范。

如何解决这些问题呢：

1.在使用过程校正加样器；10ul以下加样器

2.仔细校正温度到37℃，水浴箱为佳；  

3.必须使用去离子水或蒸馏水，不得用自来水、矿泉水等；

4.认真阅读使用说明书。  

样品加样：

1 加样不准确；  2 没有混匀。  加样时一定要仔细。加样后，再检查，以防漏加、错加。  

2 加样后，反复抽吸3次混匀，防止血清聚集孔底，导致非特异性吸附。  洗涤  洗涤不彻底  ①每次注水洗涤，应静止30秒钟；②选用吸水纸作为衬垫，每次洗涤后扣干孔内水分；

3 可选用塑料洗涤瓶。  加酶反应 漏加 滴加后，认真检查各孔  结果判断  ①包括阴性对照孔在内，各孔显色普遍偏深；②包括阳性对照在内，各孔均无显色；③阳性对照不显色，而其它样本显色正常；

4 有些标本显色不深，判断阳性困难。  ①可能是洗涤不充分；加样过量；温育时间过长温度过高；按说明书重新操作。如无改善， 可与生产厂家联系；②可能是漏加样本或酶液；温育时间过短温度过低；试剂保存不当活性下降；按说明书重新 操作。如无改善，可与生产厂家联系；③阳性对照漏加、错加或失效。重新操作。如无改善，可与厂家联系，索要对照品； ④重新操作。建议使用酶标仪，测定光吸收度，按P/N值标准判断。  ELISA试剂盒保存 保存不规范 一定要在2-8℃存放。不得过高，也不得冻存（冻存后，酶液将失效）。  对照品 对照品为冻干品 按对照管标示，加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶，充分溶解混匀。可按说明书使用。