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大家好，我是酶免生物小编又来和大家分享啦，今天我要和大家分享的是ELISA夹心法实验步骤以及注意事项。
1.包被
pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml，加入96孔板，100 μl/孔，放4 ℃，36 小时。
2.封闭
0.1 ％吐温PBS（Buffer A）冲洗96孔板三次，加3 ％BSA Buffer A（Buffer B）200 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
3.加待检样品
Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/孔，放37 ℃，3 小时。
4.加酶标抗体
Buffer A冲洗96孔板五次，3 ％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100 μl/孔，放37 ℃，1 小时。
5.显色
Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物（ABTS)），0.2 mg/ml，加3 ％H2O2，2 μl/ml，加入96孔板，100 μ/孔，室温下或37 ℃显色。
注意事项
1.待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快（6小时以内）分离血清。
2.封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。