ELISA实验中的保温小技巧

ELISA实验是我们科研实验中经常使用的实验方法，操作简单却有许多需要我们去注意的地方，今天就和大家介绍下ELISA实验中的保温小技巧。

一、什么是ELISA保温？

在ELISA实验中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育。

二、为什么ELISA反应需要保温？

ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。

三、多少温度才适宜？

温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成较多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA实验中一般不予采用。

四、保温方式

除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，然后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA试剂盒只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。

保温在ELISA实验过程中也是十分重要的，一不小心就可能对实验的结果产生影响，所以大家在实验过程中要多加注意。